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應(yīng)用案例

論文解析 | BeaverBeads? Streptavidin應(yīng)用于研究肝X受體在胸腺細胞發(fā)育中的作用

第三軍醫(yī)大學基礎(chǔ)醫(yī)學院周新元教授團隊在Cellular & Molecular Immunology上發(fā)表文章,表明肝X受體β型通過調(diào)節(jié)IL-7Rα的表達對單陽性胸腺細胞的存活起重要作用。

研究背景

T淋巴細胞,包括CD8+和CD4+ T細胞,是細胞和體液免疫反應(yīng)的重要介質(zhì),在胸腺中按發(fā)育階段產(chǎn)生。肝X受體(Liver X receptor, LXRs)是脂質(zhì)代謝中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,在T細胞增殖中發(fā)揮重要作用。然而,肝X受體是否在胸腺細胞發(fā)育中發(fā)揮作用仍不清楚。在本文中,研究者們提出了肝X受體β型通過直接結(jié)合到Il7r基因的5′-調(diào)控區(qū),促進Il7r基因轉(zhuǎn)錄,進而正調(diào)節(jié)單陽性淋巴細胞的存活。


論文解析

2020年,第三軍醫(yī)大學基礎(chǔ)醫(yī)學院周新元教授團隊在Cellular & Molecular Immunology上發(fā)表文章《Liver X receptor β is required for the survival of single-positive thymocytes by regulating IL-7Rα expression》 表明肝X受體β型通過調(diào)節(jié)IL-7Rα的表達對單陽性胸腺細胞的存活起重要作用。

為驗證這一猜想,研究者檢測了在LXRα缺失,LXRβ缺失和野生型小鼠中初始T細胞的數(shù)量和頻率。為了避免LXRβ被敲除后胸腺微觀環(huán)境改變可能導致的影響,研究者使用 LSK (LinSca-1+c-Kit+)細胞混合物生產(chǎn)了輻照變異的骨髓嵌合體小鼠。其中敲除LXRβ和野生型小鼠的數(shù)量比為1:1。為了制作骨髓嵌合體,共2000個無LXRβ 的 LSK(LinSca-1+c-Kit+)細胞分別用含有LXRβ、IL-7Rα、Bcl2或空編碼序列的逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染到致命性輻射受體小鼠中,12周重組之后進行分析。

其中,Lin-細胞的富集是通過磁珠分選的方法。通過鏈霉親和素和生物素的相互作用,將生物素化的Lin+標記物固定在BeaverBeads?  Strepavidin 鏈霉親和素磁珠上,利用磁珠去除Lin+細胞。

研究結(jié)果顯示,缺失了LXRβ的胸腺細胞分布明顯減少了。這種減少包括CD4單陽性和TCRβ+CD8單陽性。同時,雙陰性,未成熟單陽性和雙陽性胸腺細胞數(shù)與野生型小鼠的比沒有明顯變化。另外,缺失了LXRβ的鼠源CD4+ 和CD8+ T脾細胞數(shù)量也有非常明顯的下降。這些數(shù)據(jù)顯示肝X受體β型對單陽性胸腺細胞的存活起重要作用。



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