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技術(shù)專題

保持細胞高活力:首選海貍磁珠細胞分選

分選細胞數(shù)量多、沒有流式儀器、需要保持細胞高活力的小伙伴們,磁珠分選是首選的方法!

細胞分選是很多研究僧會遇到的實驗,選對了方法,實驗也就事半功倍,選擇哪種細胞分選方法是適合自己實驗的方法呢,今天小貍和大家具體聊聊……
細胞分選是根據(jù)細胞屬性,把一種細胞從多細胞樣品中分離出來的方法。細胞分選常見的方法有免疫磁珠分選、流式細胞分選、密度梯度離心、免疫密度離心,其中前兩種是最常用的細胞分選方法。那么小貍先簡單叨叨這兩種方法原理與特點。

細胞分選原理
流式分選一般是電荷式分選,即對感興趣的目標細胞(熒光染色或標記)所在的液滴充上電荷,液滴經(jīng)過電極板,通過電場作用發(fā)生偏轉(zhuǎn),從而實現(xiàn)分選。
磁珠分選使用磁珠偶聯(lián)的抗體去標記細胞,然后把標記好的細胞懸液置于磁場中,帶磁珠的細胞就留在試管里,不帶磁珠的細胞在上清中,從而實現(xiàn)分選。

流式分選與磁珠分選的比較

綜上,對于分選細胞數(shù)量多,或者沒有流式儀器,再或者需要保持細胞高活力的小伙伴們,磁珠分選是大家首選的方法。

無需流式儀,保持細胞高活力細胞分選方法——首選海貍磁珠法細胞分選

做磁珠分選,大家首先要根據(jù)自己的實驗?zāi)康呐c指標來選擇是用陽選、陰選還是復(fù)合分選。

陽選、陰選、復(fù)合分選
陽性分選:運用特異性抗體偶聯(lián)磁珠直接從細胞混合物中分離目的細胞的分選方法稱為positive?selection。陽性分選中磁珠標記的細胞即為目的細胞。該法簡單、快速、細胞得率和純度較高。如采用anti-CD14磁珠分選CD14+巨噬細胞。


陰性分選(也叫去除分選):用抗體偶聯(lián)磁珠去除無關(guān)細胞,使目的細胞得以純化和分離的分選方法稱為negative?selection。陰性分選中磁珠標記的細胞為非目的細胞。陰性分選法適用于:
①從細胞混合物中去除某種類型細胞。如腫瘤細胞;
②缺乏針對目的細胞篩選的特異性抗體,如腫瘤細胞 ;
③抗體和目的細胞結(jié)合可能誘導(dǎo)細胞活化,影響后續(xù)細胞功能分析。


復(fù)合分選:將陰性分選和陽性分選相結(jié)合的分選方法。適用于:
①分選非常稀有細胞,可采用陰性分選發(fā)先去除其他雜細胞,再采用陽性分選篩選目的細胞;
②非目的細胞也表達用來陽性選擇的抗原。
③降低細胞分選的成本,與流失分選聯(lián)合使用。(很多專家正在使用的方法)

對于磁珠分選方法,小伙伴們普遍用的應(yīng)該是美天旎或Thermo的磁珠分選產(chǎn)品。今天小貍給大家?guī)泶蟾@?,一款性價比更高的細胞分選磁珠——BeaverBeads? Streptavidin,只用普通的磁性分離架,即可進行細胞分選,細胞去除率可到80%-90%。

大粒徑磁珠分選的實驗流程圖



利用SA磁珠固定生物素標記的抗體(可根據(jù)需要去除細胞種類,選擇固定1種或多種抗體),室溫孵育15 min,洗滌、重懸后,即可進行后續(xù)的細胞分選。
磁珠和細胞投入比例推薦:
50 μL磁珠(10 mg/mL)——2 μg生物素化抗體——捕獲10^6-10^7個細胞
產(chǎn)品圖片:

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使用海貍SA磁珠已發(fā)表文章:
1、NATURE IMMUNOLOGY  卷: 16   期: 9   頁: 991-999   出版年: SEP 2015
The transcription factor TCF-1 initiates the differentiation of TFH cells during acute viral infection
2、Immunity  47, 538–551  2017.08
The Kinase mTORC1 Promotes the Generation and Suppressive Function of Follicular Regulatory T Cells
3、Frontiers in Immunology   Volume 9 , Article 1127 ,May 2018
The Kinase complex mTOR complex2 Promotes the Follicular Migration and Functional Maturation of Differentiated Follicular Helper CD4+ T cells During Viral infection

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